诊断法角逐 验糖尿病肾病
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糖尿病肾病(DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的严重并发症之一。随着糖尿病发病率的增加,DN患者日益增多,因其发病隐蔽,进展缓慢,如果任其发展,当临床上出现持续性蛋白尿时,肾脏病变已不属早期,肾脏已出现了不可逆的病变,再用药物也无法逆转。因此,早期发现糖尿病肾病有其十分重要的意义。现简要介绍三种糖尿病肾病的早期实验诊断方法。
一、尿微量白蛋白检测
(一)方法:竞争酶联抑制法。
(二)实验步聚:
1、用扑克制的抗菌素人白蛋白包被塑料板。
2、加入不同浓度的标准抗原或待测样品,37℃温育30分钟。
3、加入底物溶液和终止液,通过酶标仪比色,即可算出待测标本浓度。
(三)结论:
此法快速简便,非常适合临床常规使用。但是其缺点是DM患者中尿微量白蛋白的阳性率较低,在Ⅱ型糖尿病病人中,阳性率不足20%。
二、尿铜蓝蛋白检测
(一)方法:酶联免疫吸附测定法。
(二)实验步骤:
1、铜蓝蛋白抗体包被,冰箱过夜。
2、加入不同浓度的标准抗原或待测样品,37℃温育1小时。
3、加入酶标铜蓝蛋白抗体,37℃温育1小时。4、加入底物溶液和终止液,在酶标仪上读取A值,即可算出待测标本浓度。
(三)结论:
该方法进行了精确性和稳定性实验,方法比较稳定可靠。并对114名DM患者的尿铜蓝蛋白含量及尿微量白蛋白含量进行相关分析,两者呈正相关,且在尿微量白蛋白阴性的糖尿病病人中,仍有49、5%的病人尿铜蓝蛋白阳性。因此,尿铜蓝蛋白质检测很有可能成为DN早期的较第三诊断指标。
三、尿白蛋白片段的检测
(一)方法:免疫印迹法。
(二)实验步骤:
1、尿样与样品处理液等量混合,置沸水浴3分钟。2、聚丙烯酰胺凝胶电泳,每孔加样20μι,电压200V。3、将胶上的蛋白带转印到硝基纤维素膜上,转印电流340mA,2小时后取出,封闭1小时。4、加入白蛋白抗体和酶标白蛋白,冰箱过夜。5、加入显色液,出现蛋白带为阳性,未见蛋白带为阴性。
(三)结论:
通过实验得出凡是尿白蛋白阳性者,尿白蛋白片段也为阳性,而尿白蛋白阴性者中,仍有30%为尿白蛋白片段阳性。曾有人对后者进行随访观察,发现他们中有18%发展为尿白蛋白,蛋白阳性。因此,认为尿白蛋白片段具有更高的特异性和早期栓出率,能更早地发现DN患者。
综上所述,除尿微量白蛋白检测是目前人们较为公认的DN早期诊断指标外,其它两种都还在观察及研究中。目前国内外还没有建立尿铜蓝蛋白酶联免疫测定方法,市场上买不到试剂盒,其作用机理还待于进一步深入研究。免疫印迹法分析尿白蛋白片段,在我院已应用于临床,对尿白蛋白阴性者,再用本法检测分析,可以更有效地避免早期糖尿病肾病的漏诊,是预测肾脏病变的更为早期,更为灵敏的指标。
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