艾滋病检测方法及优缺点
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艾滋病毒检测方法有很多种,搜集的检测方法介绍如下:
一、HIV病毒分离
常用方法:用活细胞、组织、胚胎或动物分离病毒。
细胞培养分离病毒主要过程:细胞培养,病毒分离和病毒鉴定。
基本原理:病毒在活的敏感细胞、组织、胚胎或动物体内复制繁殖。
意义:从病变部位(活检组织、脑脊液、疱疹液、体腔积液)或血液中分离到病毒的诊断意义很大。从粪便中分离到病毒(如巨细胞病毒,肠道病毒等)的意义应结合其它病毒学检查结果(如抗病毒抗体等)来判定。
HIV病毒分离检测方法评价:优点:是诊断病毒性疾病的金标准,特异性强,能发现新病毒,反应传染性,可在试验动物中验证。
缺点:耗时长,一般只能做回顾性诊断,成本和技术要求高,敏戌性不高,有些病毒无法或极难培养,不同的病毒需要不同的分离方法。
发展方向:短时细胞培养加免疫荧光或免疫酶染色法快速检测病毒抗原。
二、电子显微镜直接检查HIV病毒
常用方法:普通电子显微镜检查,免疫电子显微镜检查。
基本原理:标本经负染处理后,根据病毒颗粒的形态作出判断。
意义:能根据病毒颗粒的形态诊断,如轮状病毒、腺病毒、甲型肝炎病毒、星状病毒等。
电子显微镜直接检测技术的评价:优点:可直接检测标本;能发现新病毒;能直观地显示组织或细胞内的病毒。可用于检测极难分离的病毒。
缺点:机器价格昂贵,技术要求高,不太适用于常规病毒学诊断试验或大量标本的检测;病毒量较大时才易得到阳性结果,应用范围有限,且不能鉴别病毒的血清型。#p#副标题#e#
三、检测HIV病毒的抗原成分
常用方法:对组织或细胞内的病毒成分可用免疫荧光染色、免疫酶染色等;对细胞外的或可溶性的病毒成分可用方法有:凝集试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫、免疫渗滤层析试验(胶体金)等。
基本原理:抗病毒抗体致敏的血球或吸附抗病毒抗体的载体颗粒与病毒结合; 病毒抗原和抗体在凝胶中相遇形成沉淀线; 标记的抗病毒抗体与相应的病毒抗原结合或反应,通过某种指示系统显示病毒抗原的存在。
意义:对大多数病毒而言,病毒抗原阳性一般可作为诊断急性病毒感染的依据。但对有些病毒(如巨细胞病毒,受滋病毒,乙肝病毒),病毒抗原阳性常不能说明宿主的感染状态,如急性、慢性或携带状态。该方法能用于早期快速诊断病毒感染,特别适用于临床。
四、病毒血清学(HIV抗体检测)
常用方法:中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、免疫荧光、免疫酶染色、ELISA、化学发光、时间分辨免疫荧光、荧光偏振、胶体金。
基本原理:抗原和抗体特异性地结合或反应,通过某种指示系统显示病毒抗体的存在。
意义:恢复期血清中抗病毒抗体滴度≥4倍升高有诊断意义; 血清抗病毒IgM抗体阳性可作为诊断该病毒近期感染的依据。
HIV抗体检测化学发光法评价:优点:正常用免疫学方法中最敏感,判断结果较客观,可自动化,一次可检测大量标本。缺点:多为进口产品,试剂和仪器较贵。
HIV抗体检测ELISA法评价:
优点:可用机器判读结果,便于自动化和一次性检测大量标本,检测病毒抗体的敏感性比免疫荧光法或免疫酶法高。
缺点:检测抗原时,与免疫荧光法相比,敏感性较低,一般只能检测可溶性病毒抗原。
发展方向:重组抗原,捕获法。
IV抗体检测免疫荧光或免疫酶染色法评价:
优点:能检测细胞内的抗原,需要相对较少的细胞,固定后的标本可存放相当长的时间,能显示病毒抗原的组织学和细胞学分布特点。免疫酶染色法不需要荧光显微镜。工作人员需有丰富的经验,试验结果可能受主观因素的影响。免疫酶染色有可能受内源性酶的影响出现假阳性。间接法的敏感性比直接法的敏感性高,但特异性稍低。#p#副标题#e#
五、HIV RNA基因诊断(检测病毒遗传物质,如PCR)
常用方法:PCR、套式或巢式PCR、逆转录PCR
基本原理:在体外条件下(至少1对DNA引物,dNTP,缓冲液)DNA聚合酶催化合成与模板DNA互补的新链。
意义:病毒核酸阳性一般可作为诊断病毒感染的依据,但对有些病毒(如巨细胞病毒,爱滋病毒,乙肝病毒),不能说明宿主感染状态,如急性、慢性或携带。由于PCR的敏感性非高常,实验条件要求严格,根据PCR试验结果有时尚不能确定病毒或现疾病的关系,该技术在检测不同标本,诊断不同病毒性疾病中的意义有待进一步评价。
HIV RNA基因PCR检测评价:优点:敏感、特异,是目前使用的病毒学诊断技术中最敏感的技术方法; 一次可检测 较大量标本;能检测出与宿主细胞基因组整合的病毒核酸序列;可用于检测目前不能或不易分离的病毒。
缺点:对诊断未知病毒的感染无能为力,被检测的病毒核酸序列必须已经清楚;需要较多仪器设备,试验成本较高;有试验污染的可能性。
发展方向:杂交PCR,定量PCR
艾滋病毒常用检测方法有很多种,每个医院和疾控不会完全采用,而是提供几种艾滋病检查方法。一般用于艾滋病初筛检测都是用HIV抗体检测方法,目前普遍采用的是酶联免疫法ELISA,化学发光法和胶体金快速法(艾滋病检测试纸),随着生活节奏加快,目前艾滋病检测发展方向也越来越快速了,艾滋病检测试纸(胶体金)这种高科技新型的检测方法,得到了广泛应用,还被用于个人家庭自测,只需要十五分钟,准确率却高达99.7%以上,相当于疾控中心专业水平。
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